Relationship of p21WAF1 gene polymorphisms with protein expression in breast carcinomas

AIM: To investigate the relationship between p21^WAF1gene polymorphisms and protein expression in breast carcinoma. METHODS: Polymerase chain reaction single-strand conformation polymorphisms technique (PCR-SSCP) and immunohistochemical assay of S-P immunostaining technique were used to study polymorphisms of p21^WAF1 and protein expression respectively on the specimen of paraffin-embedded tissues in 100 cases of breast carcinomas and 40 benign breast diseases as control. RESULTS: Two p21^WAF1 gene polymorphisms were found in 18% (18/100) of breast carcinomas and 5% (2/40) of control samples. The difference between the two groups was statistically significant (χ²=3.94, P＜0.05). The positive immunohistochemical reaction of p21^WAF1 protein were found in 50% (50/100) of breast carcinomas and 12.5% (5/40) of control samples. The difference between the two groups was statistically significant (χ²=16.84, P＜0.01). The positive immunohistochemical reaction of p21^WAF1 protein were found in 100% (18/18) of breast carcinomas with p21^WAF1 gene polymorphisms and 39% (32/82) of no p21^WAF1 gene polymorphisms. The difference between two groups was statistically significant (χ²=21.95, P＜0.01). The p21^WAF1 gene polymorphisms were correlated with the protein expression in breast carcinomas (r=0.576, P＜0.01). CONCLUSION: p21^WAF1 gene polymorphisms may create the different copies of mRNA and may make relevant protein molecules.     

Induction of tumor-specific cytotoxic T lymphocytes in vitro by dendritic cells pulsed with different glioma antigens

AIM: The goal of this study was to compare different methods for tumor antigen preparation, to observe the induction of tumor-specific cytotoxic T lymphocytes in rats by dendritic cells (DCs) pulsed with different tumor antigens. METHODS: The precursors of dendritic cells were isolated from bone marrow of rats, stimulated in vitro with recombinent rat granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (rrGM-CSF) and interleukin-4 (rrIL-4). Then rat DCs were pulsed with C6 tumor cell antigens prepared with different methods: freeze-thaw, boiling or total protein extracted from ultrasonic crushed tumor cell. Subsequently primed DCs were cocultured with T lymphocytes isolated from spleen to induce CTL. Lymphocyte chemoattractant factor from DCs and cytokine IFN-γ release were determined by ELISA, the cytotoxicity of CTL was assayed by JAM test. RESULTS: DCs pulsed with boiled tumor cell in vitro induced an enhanced ability of T-cell proliferation and cytotoxic T lymphocyte activity.CONCLUSION: Our results demonstrated that DCs primed with boiled tumor cell may represent a method for inducing immune responses against the entire repertoire of tumor antigens of malignancies.     

禽流感病毒夹心ELISA快速检测方法的研究

以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2亚型)提纯物为免疫原，制备出鸡抗AIV和兔抗AIV抗体，经用琼脂扩散法测得效价分别为1:32和1:16。以纯化的鸡抗AIVIgG为包被抗体，兔抗AIVIgG为第二抗体，建立了检测AIV抗原的夹心ELISA法。结果表明，鸡抗AIVIgG的最佳包被浓度为1μg/mL，兔抗AIV IgG的最适工作浓度为5μg/mL；对已知的阳性样品，用夹心ELISA法测得的病毒滴度比血球凝集滴度高16倍以上，且能检出其它亚型的禽流感病毒；与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、鸡痘病毒、马立克氏病病毒等无交叉反应，说明本方法有很高的特异性及敏感性。对14个鸡场送检的、患有呼吸道疾病或有腹膜炎、眼炎、产蛋下降、怀疑为禽流感感染的病鸡进行了检测，结果有7个鸡场为阳性。本方法的建立为禽流感病鸡群的临床检验提供了一种方便、敏感、快速的检测方法。     

第十九期鸡胚原始生殖细胞的冷冻保存

采用Ficoll密度梯度离心,提取第 19期(孵化 72h)性腺中的PGCs,对其应用不同的冷冻保护液和不同的平衡方法进行冷冻保存,并于复苏后进行体外培养。复苏后的PGCS用台盼蓝染色检测其存活率,结果发现:从第 19期性腺中获取的PGCs在同一种冷冻保护液下,采用不同的平衡方法进行冷冻,对PGCs的存活率有显著影响(P<0.05)或极显著影响(P<0.01);平衡方法相同,在不同冷冻保护液之间存在显著(P<0.05)或极显著 (P<0.01)差异。PGCs经体外培养 24h后再进行冷冻保存,复苏后其存活率、体外培养存活时间均极显著(P<0.01)短于分离后直接冷冻的PGCs。     

HBV/HAV复合抗原基因在CHO细胞中的表达

为探讨HBV／HAV复合疫苗的可行性，利用DNA重组技术将HBsAg与HAW复合多表位抗原基因VPX进行融合，插入到真核表达质粒pVAX1多克隆位点，构建成核酸表达疫苗pVAX1／SVPX，将其转染CHO细胞。转染细胞培养48h后，进行RTPCR、Western-blot、ELISA分析，结果表明HBV／HAV复合抗原基因SVPX能够在CHO细胞内转录、表达，融合蛋白具有HBV和HAV抗原的特性。     

猪2型圆环病毒核酸疫苗免疫效应研究

PCR扩增PCV2 ORF2和BVP22基因。将ORF2基因克隆入真核表达载体pCDNA3．1（＋），构建了pCORF2作为核酸疫苗免疫小白鼠。同时将具有蛋白转导功能的BVP22基因分别克隆到ORF2基因的上游和下游，使二者融合表达，命名为pCORF2BVP22和pCBVP220RF2。分4组肌肉免疫BALB/c小白鼠，分别注射pCDNA3．1（＋）、pCORF2、pCORF2BVP22和pCBVP220RF2，共免疫2次，间隔2周，分别于首免后2周和二免后4周采血，ELISA法检测体液抗体。同时为在体外验证ORF2和BVP22基因的真核表达，将ORF2和BVP22基因分别克隆入pEGFP-N1载体，构建了pNORF2和pNBVP22，转染Hela细胞后在荧光显微镜下观察到了ORF2和BVP22在体外的瞬时高效表达。结果显示，通过两次免疫后，各疫苗组均产生了针对ORF2的体液抗体，同时证明BVP22可增强核酸疫苗的免疫效果，其中以BVP22在ORF2上游效果更好。本研究为防制猪2型圆环病毒感染提供了较为理想的侯选疫苗。     

猪伪狂犬病基因缺失疫苗的制备、安全性、免疫原性、保存期测定及区域试验

为了提供有效的伪狂犬病疫苗，用鸡胚成纤维细胞扩大培养了PrV HB-98突变株（TK^-/gG^-/LacZ^＋），研制了伪狂犬病基因缺失疫苗，并对该疫苗经肌肉接种、经口等免疫途径的最小免疫剂量进行了测定，同时也对4批疫苗的安全性、效力、免疫期和保存期进行了检测；同时将4批疫苗用于免疫23个猪场的母猪、新生仔猪和育肥猪进行区域试验。测定结果表明，疫苗经上述两种途径接种对不同阶段猪的最小免疫剂量均为10^5.0 TCID50；10倍免疫剂量的疫苗对初生仔猪、15日龄仔猪和妊娠母猪是安全的，免疫猪能抵抗强毒的攻击；疫苗在4℃和-20℃下分别可保存6个月和12个月。对伪狂犬病毒抗体阴性的70日龄商品猪和种猪的免疫期为6个月。田间试验表明，4批猪伪狂犬病基因缺失疫苗安全有效，并可用于仔猪发病时的紧急接种。为猪伪狂犬病基因工程疫苗的制备与应用提供了有力的依据。     

NO介导的Ca2+信号对渗透胁迫下紫花苜蓿幼苗光合特征及抗性的影响

以紫花苜蓿幼苗为材料,用聚乙二醇(PEG-6000)作为渗透介质人工模拟干旱条件,外源喷施NO供体硝普钠(SNP)、钙信号试剂CaCl₂、NO抑制剂亚甲基蓝(MB)和Ca²⁺通道阻断剂LaCl₃,对紫花苜蓿幼苗光合特征、抗氧化酶活性及过氧化物酶(POD)同工酶图谱进行研究,探讨了渗透胁迫下NO介导的Ca²⁺信号对紫花苜蓿幼苗光合作用及抗氧化能力的影响。结果表明:在渗透胁迫条件下,施加SNP、CaCl₂均能够有效缓解叶片叶绿素a、类胡萝卜素及总叶绿素含量降低,提高叶片净光合速率(P_n)、气孔导度(G_s)及气孔限制值(L_s),而对胞间CO₂浓度(C_i)没有缓解作用。SNP、CaCl₂及SNP+CaCl₂处理提高了幼苗叶片中抗氧化酶活性和脯氨酸含量,降低了丙二醛(MDA)含量。其中共处理时效果最为显著,第4天 SOD、POD、CAT活性较PEG处理升高了39.29%、30.41%和56.24%,脯氨酸含量增加了45.59%,MDA含量降低了45.59%。POD同工酶图谱在第4天时酶谱带数最多,POD活性最强,且SNP+CaCl₂共处理下出现新酶带。而添加外源NO的同时添加Ca²⁺通道阻断剂LaCl₃,紫花苜蓿幼苗光合速率、抗氧化酶活性及脯氨酸含量均降低,丙二醛含量增加,添加Ca²⁺信号的同时施加NO抑制剂MB也具有相同的作用,说明Ca²⁺信号参与NO信号转导过程并相互作用共同调节渗透胁迫下紫花苜蓿幼苗的生理应答响应。     

2016年江苏省猪伪狂犬病血清流行病学调查

为了解江苏省猪伪狂犬病病毒（PRV）感染和免疫情况,采用ELISA方法,对2016年采集的2 715份猪血清样品进行PRV gE和gB抗体检测。结果显示：PRV gE样品阳性率为18.49%,场点阳性率为25.07%;PRV gB样品阳性率为55.35%,场点阳性率为70.21%。结果表明：江苏省PRV野毒感染情况较严重,且免疫效果并不理想;各地市的防控效果差异较大;规模场是净化该病的关键。     

如何做好重大动物疫病防控消毒药品的政府采购

本文指出了政府在消毒药品采购中存在高素质专业人才匮乏,采购方评标标准不一,低价中标忽视质量,不同品牌消毒剂功效差异大,国家标准有待完善等问题,建议政府采购以质量为先,尽快出台消毒药品采购指南,加强采购人员专业素质培养等。此外,政府采购的消毒药品应选择高效速效、安全低毒、无三致、使用成本低、适用大环境使用的药品,这有助于重大动物疫病防控工作的开展。